人小胶质细胞HMC3培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代

备注：用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养；如对比效果不佳，建议直接购买[PG电子]的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞收到后，应培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后将其置于超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。在显微镜下观察细胞的生长情况，并拍摄多张不同倍数的照片（最佳为40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据；如未提供照片则视为状态良好。（传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比，换液后注意将瓶盖拧松。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，需将完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基置于37℃、5% CO2孵箱进行培养；当细胞密度超过80%时，则进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清液，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；若细胞大多变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基并重悬。
4. 按照1:2比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变化，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，再轻吹使其脱落，转移至15ml离心管中，进行1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml[PG电子]无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱储存；若后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放超过24小时后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，待冻存管中无晶体后，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天使用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

由于一些细胞的贴壁性较弱，运输过程中可能会发生细胞脱落，这是正常现象。如果脱落的细胞较多，可以将培养瓶中的培养液全部收集至离心管，并进行1000 RPM离心5分钟，将上清液用于过渡培养（后期可进行对比培养），沉淀后加入1-2ml胰酶轻轻吹打、重悬后消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止反应，再离心、弃上清，补加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况

可重发的情况包括：

1. 运输过程中细胞遭遇问题，例如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，符合条件重发；
2. 收到产品48小时内出现污染，需提供实验真实结果以核实后重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏24小时后若细胞未存活（需提交真实的细胞状态照片），可重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时后且未开封出现污染，符合条件可重发；
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提出，需用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发；
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，若3天未告知即视为产品合格；4-7天内问题需提供前3天的细胞照片及操作步骤，且与技术人员沟通后，若判定为我方责任，则可重发。

2）细胞出现问题的不予重发情况

不予重发的情况包括：

1. 客户造成的细胞污染，无法重发；
2. 客户操作不当导致细胞状态不佳，不予重发；
3. 使用非本库推荐培养体系导致细胞状态不良，无法重发；
4. 若细胞状态不良且未提供培养前3天的照片，不予重发；
5. 细胞培养期间经过其他处理的，无法重发；
6. 如收到后未在2天内告知问题，则不予重发；
7. 具体情况将根据实际情况进行判定。