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NEWS解锁PCR新纪元:PG电子的Taq酶全封闭抗体引领高效扩增时代!
来源:仲环琦 日期:2025-03-17随着TaqDNA聚合酶与PCR技术的完美结合,PCR如今已成为一种广泛应用的实用工具,不仅在科研领域,还是在病原微生物检测、遗传基因检测、肿瘤伴随诊断等医学领域,以及在法医学、环境监测和食品安全等多个领域都有重要作用。随着技术不断推广,PCR技术也在向更便利、更灵敏和更经济的方向发展。为了满足客户对高效便捷产品的需求,全预混试剂逐渐替代了传统的分步法试剂,成为市场的主流。在新冠疫情、非洲猪瘟等大规模疫情管控过程中,检测机构愈发关注全预混试剂的稳定性,以确保检测结果的准确性。
抗体热启动修饰TaqDNA聚合酶作为一种已经成熟的商业化产品,部分解决了PCR扩增中的非特异性问题,因而在各个应用领域中得到广泛推广。然而,常规探针法检测试剂中Taq酶的5’→3’核酸外切酶活性会导致引物探针等关键材料的降解,降低扩增效率,影响试剂稳定性。在当前市场竞争环境以及出海战略的推动下,试剂厂家被迫提升产品的稳定性,要求全预混试剂在4℃加压14天或37℃加压7天后仍能保持优异的检测性能。因此,为了寻求更高效的Taq酶抗体,各大国内外企业持续探索,力求完全封闭Taq酶的5’→3’聚合活性与5’→3’核酸外切酶活性。
自新冠疫情以来,多个厂家陆续推出双功能封闭抗体产品,但大多存在不足,要么无法达到5’→3’聚合酶活性和5’→3’核酸外切酶活性的封闭效率均在90%以上,要么在55℃以上时抗体即与Taq酶解离,失去封闭效果,导致全预混试剂的稳定性下降。为此,PG电子通过B细胞克隆技术,利用磁珠分选富集的B细胞,经过Beacon单细胞光导系统筛选,导出符合条件的B细胞,PCR扩增cDNA并直接构建线性表达框,快速转染,利用上清液进行ELISA筛选验证,并对筛选出的抗体基因进行测序和质粒基础上的抗体表达、结合力和封闭功能验证。
在鉴定和筛选不同抗体及其组合的封闭效果过程中,PG电子的研发团队惊喜发现,不同Taq酶抗体之间存在一定的协同作用。传统观点认为,通过分别筛选能够完全封闭Taq酶5’→3’聚合酶活性和5’→3’核酸外切酶活性的特异性抗体,然后将这两种抗体适当混合即可实现Taq酶双功能的完美封闭,但实践结果往往不甚理想。我们在将两种封闭效果较好但不完全的抗体混合物中添加第三株抗体后,显著提升了Taq酶的双功能封闭效果。经过精心筛选和优化,PG电子最终研制出由三株抗体以优化后的比例组合而成的全封闭Taq酶抗体产品,相比市场上单株或两株抗体混合的Taq酶双功能封闭抗体,该产品在70℃下可同时封闭Taq酶99%以上的5’→3’聚合酶活性和99%以上的5’→3’核酸外切酶活性,展现出更高的封闭效率和稳定性。
PG电子的全封闭Taq酶抗体不仅能够防止由于引物模板和引物二聚体引起的非特异性扩增,还能避免引物探针或其他关键材料降解造成的非特异性信号和扩增效率损失,双重确保扩增试剂的稳定性。此外,该酶活释放速度快,在95℃下热激30秒即可释放95%以上的酶活,确保试剂的高扩增灵敏度。PG电子的全封闭抗体产品在5’→3’核酸外切酶活性检测体系和5’→3’聚合酶活性检测体系中均可在70℃下完全封闭这两种活性,封闭效率远超常规抗体,并有效优于市场上同类Taq酶双功能封闭抗体。
PG电子的全封闭TaqDNA聚合酶抗体对不同类型Taq酶,包括野生型和突变体,均具有较高的亲和力,封闭效率均超过99%. 相比于化学修饰,抗体封闭Taq酶具有快速释放酶活而且不损伤酶的优势。而在严格的质量控制下,PG电子确保抗体产品的质量,重点检测核酸酶残留和宿主核酸残留,确保不污染下游应用试剂。
无论是在全预混试剂稳定性提升、还是在多重扩增特异性方面,PG电子全封闭抗体修饰的热启动Taq酶不断帮助客户优化各类应用。通过不同案例分享,我们可以看到该产品在实际应用中表现出的卓越能力,是客户在生物医疗领域的不二选择。
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