01 dsRNA是mRNA原液质量控制的关键必检项

mRNA疫苗是一种通过信使RNA（mRNA）的分子副本诱导免疫反应的疫苗。mRNA疫苗由脂质纳米颗粒（LNP）和被封装的RNA组成，能够有效保护RNA链并帮助其进入细胞。随着新冠疫情的爆发，mRNA疫苗因其在疗效、研发速度、成本、生产可扩展性和安全性等方面的优势而受到广泛关注。mRNA的制备和转录是疫苗生产的关键步骤，而mRNA的质量直接影响到疫苗的临床表现。CDE发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则》明确要求严格控制包括双链RNA（dsRNA）在内的mRNA相关杂质的含量。dsRNA是指double-stranded RNA（双链核糖核酸），其在IVT（体外转录）过程中由T7RNA聚合酶转录产生，可以形成不同类型的dsRNA副产物。

包裹mRNA的LNP通过细胞吞噬作用释放mRNA到细胞质中，而自由mRNA会被核糖体翻译成蛋白。在内体中，dsRNA杂质会被TLR3等受体识别，引发信号转导并促进包括I型干扰素（IFN）在内的促炎性细胞因子的分泌。相应地，细胞质中的dsRNA也会被RIG-1和MDA5识别，进一步上调干扰素的表达。由于这些机制，dsRNA的免疫原性可能导致mRNA翻译效率下降，并影响重复给药时药物效力的稳定性。因此，在mRNA疫苗生产过程中，严控dsRNA含量至关重要，这就需要生产厂商对dsRNA进行准确的定量检测。

02 ELISA法更适合用于dsRNA定量检测

目前，dsRNA的检测方法包括dot blot、ELISA、HTRF和HPLC。USP《Analytical Procedures for mRNA Vaccine Quality（Draft Guidelines）》中推荐的dsRNA检测方法为dot blot和ELISA。HPLC方法在分辨率和准确度上可能无法满足需要，而Dot blot法相对操作简便，但其灵敏度较低。相比之下，ELISA方法以其灵敏度和广泛应用而备受青睐，已成为商业上成熟的免疫分析方法之一。ELISA采用双抗体夹心法，通过定量的包被抗体吸附固定于微孔板表面，再通过样品和检测抗体的结合，利用酶催化作用显色，最终实现对dsRNA的定量检测。

在品牌方面，PG电子致力于提供高质量的dsRNA ELISA定量检测试剂盒，具有操作简便、稳定性高等优势。为了满足mRNA生产和技术变革的需求，我们正在开发同时具备高灵敏度和特异性的检测体系。

03 搭配四种修饰类型标准品的dsRNA ELISA定量检测试剂盒，稳定、准确、灵敏

在开发dsRNA ELISA定量检测试剂盒的过程中，标准品的制备、定量和选择是关键。尽管现有的一些ELISA试剂盒使用polyI:C作为标准品，但其识别响应的差异可能导致定量不准确。因此，我们倾向于自主研发序列随机、高纯度，且定量准确的dsRNA标准品。mRNA疫苗或药物的自免疫原性主要源于残留的dsRNA杂质及mRNA本身，影响了mRNA的稳定性和效果。引入化学修饰的核苷酸可以减轻这一影响，从而提高疫苗的效能。

在处理不同修饰类型的dsRNA时，在配备同类标准品的情况下，可以更好地确保定量准确。此外，尽管抗体对dsRNA的识别可能受到序列和碱基组成的影响，我们通过优化筛选抗体和浓度组合，旨在将这种影响降到最低，确保测定结果的可靠性。

通过结合上述技术，PG电子正在持续推动生物医疗领域的技术进步，为mRNA疫苗的生产提供支持，通过高效的dsRNA定量检测，为疫苗的研发与应用奠定基础。