IPS诱导肠类器官培养策略 - PG电子助力生物医疗创新

来源:钱瑗曼日期:2025-03-13

IPS诱导肠类器官的培养可分为三个主要阶段：人多能干细胞的培养、内胚层的分化以及中/后肠的模式化诱导。本文将重点讲解第三阶段——类器官培养，重点在于如何有效培养和传代人类肠道类器官。

类器官培养概述（14-28天）

在进行类器官培养之前，需要准备一系列试剂和耗材，包括正常人肠类器官培养试剂盒、基质胶、离心管、细胞培养板等。具体准备的组件及其规格如下：

这一过程是原代操作中至关重要的步骤，主要包含以下内容：

基质胶需在金属冰盒中于4℃过夜融化，移液管和离心管需提前在-20℃冷却至少半小时。融化后的基质胶建议于2周内使用完毕。

使用24孔细胞培养板，每孔添加25µl的基质胶球状体混合物，并加入500-750µl的类器官培养基。

推荐的接种比例为基质胶总体积与球状体总体积的比为25:1，具体可以根据细胞团的沉淀量进行调整。

在金属冰上进行操作，先将基质胶融入细胞团并轻轻混均，然后进行点板操作，整个流程需控制在半分钟内，以保持基质胶的良好流动性。

铺好的培养板应放置于37℃的培养箱中约40-60分钟，以确保基质胶成胶，之后加入类器官培养基进行培养。通常在10-14天后，类器官直径可达到200-500µm，可以进行传代操作。

根据类器官的数量和体积，传代分为两种情况：类器官数量较多或体积较大时的传代和数量不足或体积较小时的传代。

通过移液器轻柔地收集类器官，并采用冷却的传代缓冲液进行洗涤，这有助于进一步去除基质胶。

添加适量的类器官传代消化液在超净台内消化以形成细胞团，务必注意不要消化成单细胞，以减少细胞存活率。

准备工作和接种要求与初次培养相同，确保在操作过程中始终保持冰冷环境。

此时需要进行适度的收集、洗涤和重悬，确保细胞团集中，提高培养效益。

类器官在处于生长的指数期时进行冻存最为合适，此时的类器官直径在100-200µm为最佳。在冻存时，应及时处理以避免DMSO对类器官的损伤。

在复苏类器官时，需准备37℃的水浴锅，确保细胞在解冻过程中迅速恢复活性。操作完成后，继续培养2周，以便类器官再次生长至可进行传代的状态。

通过遵循上述步骤并优化细节，您将能够高效生成功能性的人类肠道类器官，适用于疾病建模和药物筛选等研究。若有实验问题，欢迎与我们交流！我们推荐PG电子相关产品，以支持您的实验需求。